功能性的維生素-D主要包括維生素-D3和維生素-D2。維生素-D 除了具有傳統(tǒng)意義上的骨骼效應，它還有著廣泛的非骨骼效應，與心血管疾病、免疫疾病、糖尿病、腫瘤等疾病密切相關。25-羥基維生素-D（25OHD）測定是衡量維生素-D 營養(yǎng)狀態(tài)的最佳指標。根據(jù)測定原理不同，目前 25OHD 的測定方法可分為多種，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）具有特異性強、準確性高的特點，被認為是評價維生素-D 營養(yǎng)狀況的“金標準"測定法，美國NIST的SRM972a標準參考物質(zhì)用于測定的校準品。

通過測定 25OHD 濃度來評價維生素-D 水平，現(xiàn)有多種方法用于臨床 25OHD的測定，根據(jù)方法原理，可分為酶免疫分析法和色譜法。由于所有的維生素-D羥化物都可能發(fā)生抗體抗原結(jié)合反應，因此酶免疫分析法只能測定 25OHD 總量，無法同時測定 25OHD2和 25OHD3的濃度。現(xiàn)有 25OHD 的色譜分析方法包括高效液相色譜法（HPLC）和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）。由于可分離并檢測不同的分析物，色譜法可區(qū)分并能分別定量 25OHD2和 25OHD3。

色譜法可將 25OHD2、25OHD3與維生素-D其他代謝物實現(xiàn)有效分離，提高檢測特異性。HPLC 是早期應用較多的色譜法之一，可同時檢測 25OHD2和 25OHD3，具有良好的精密度，與 LC-MS/MS 法結(jié)果一致性較好。與免疫法相比，HPLC的相對不確定度小，分析成本更低，甚至還有 HPLC 商業(yè)試劑盒用于 25OHD的測定。但是 HPLC 的不足之處是分析時間長、檢測通量小、靈敏度低、所需樣品量大，不適合臨床應用，已經(jīng)*被 LC-MS/MS 所替代。

LC-MS/MS 是色譜法中最為常用的 25OHD 檢測方法，樣品經(jīng)處理后采用液相色譜分離，檢測器為串聯(lián)質(zhì)譜儀，在多反應監(jiān)測掃描模式下，實現(xiàn)分子離子和碎片離子兩次質(zhì)量選擇，可同時檢測 25OHD2和 25OHD3，具有非常高的檢測特異性，被認為是“金標準"的檢測技術。LC-MS/MS 更加契合現(xiàn)代臨床實驗室的工作流程，可*臨床檢測方法準確性、特異性、檢測通量的要求。25OHD 的 LC-MS/MS檢測方法都是實驗室內(nèi)部開發(fā)的，不同的實驗室采用不同的標準品來源、貯備液配制、樣品處理方法等，影響了室間可比性。

而采用共同的校準品、參加英國維生素-D 代謝物室間質(zhì)評計劃(DEQAS)、美國病理學家協(xié)會（CAP）的能力測試等措施有助于改進方法間、實驗室間測定結(jié)果的可比性：美國標準技術研究（NIST）所提供血清 25OHD2和 25OHD3的SRM972a標準參考物質(zhì)，采用 LCMS/MS 測定靶值。2009 年 DEQAS 有 35 國家、670 家實驗室參加，目前我國尚無相應的 25OHD 的室間質(zhì)評計劃。