1. 預期用途

這些材料代表國際輸血協會/國際血液學標準委員會 (ISBT/ICSCH) 分發(fā)。

任何酶制劑的整體性能是其蛋白水解效力及其使用方法的產物。特定酶制劑的功效應通過真陽性反應的敏感性和在推薦的技術中實現的假陽性反應的敏感性來判斷。木瓜蛋白酶批次 92/658 相當于以前的木瓜蛋白酶批次 94/676分發(fā)用于此用途。使用參考抗 D 91/562 和六種惰性血清（2 組 A、2 組 B 和 2 組 O )，在兩階段參考技術中收集至少四個 O R1r 組血液樣本?？?D 91/562 不能用作血型試劑。

2. 注意

NIBSC92/658木瓜蛋白酶制劑用于抗D標準品 不適用于人類食物鏈中的人類或動物。

91/562 制劑含有人源材料，經 PCR 檢測發(fā)現 HBsAg、HIV 抗體、HCV 抗體和 HCV RNA 均為陰性。制劑 92/658 不含人源材料。與所有生物來源的材料一樣，這種制劑應被視為對健康有潛在危害。應根據您自己實驗室的安全程序使用和丟棄它。此類安全程序應包括戴防護手套和避免產生氣溶膠。打開安瓿或小瓶時應小心謹慎，以免割傷。

3. 單元

不適用

4. 內容

生物材料原產國：英國。

5. 存儲

將未開封的安瓿瓶存放在 -20oC 或以下。

請注意：由于凍干材料固有的穩(wěn)定性，NIBSC 可以在環(huán)境溫度下運輸這些材料。

6. 開瓶指南

輕輕敲擊安瓿以收集底部（標記）端的材料。確保在嘗試打開之前，用金剛石或碳化鎢頂端的玻璃刀銼或其他合適的工具在頸部狹窄部分對安瓿進行全面刻痕。將安瓿瓶放入安瓿瓶開啟器中，將分數定位在“A"位置；如下圖所示。用布或幾層薄紙圍繞安瓿。握住安瓿瓶和支架并在“B"點擠壓。安瓿瓶會突然打開。注意避免割傷和彈射玻璃碎片進入眼睛。小心不要從安瓿瓶中丟失任何材料，并且不要讓玻璃落入安瓿瓶中。安瓿瓶開啟裝置的側面視圖包含一個準備打開的安瓿瓶。 “A"是得分標記，“B"是施加壓力的點。

7. 材料的使用

NIBSC92/658木瓜蛋白酶制劑用于抗D標準品 在重新配制之前，不應嘗試稱量凍干材料的任何部分

a) 凍干材料的重構

按如下方法重新配制每個安瓿中的全部內容物：- 木瓜蛋白酶 (92/658) – 加入 2ml 無緩沖的 0.15M NaCl Anti-D (91/562) – 加入 1ml 蒸餾水/去離子水 將安瓿置于室溫 (19- 25oC) 15 分鐘，不要搖晃。然后，輕輕攪拌后，重構的材料應在 2-6 oC 下儲存并在 24 小時內使用。

b) 從至少四個合并的 O R1r 組血樣中等比例制備一池經過洗滌的濃縮紅細胞。

c) 將兩份復溶的參考木瓜蛋白酶制劑 (92/658) 與一份濃縮紅細胞混合，并在 37oC 下孵育 15 分鐘。

d) 用磷酸鹽緩沖鹽水（0.15M NaCl 中的 10mM pH 7.2 磷酸鹽緩沖液）洗滌處理過的細胞 3 次。在 PBS 中將處理過的細胞重新懸浮至 3% (v/v)。

e) 在含有 2% (w/v) 牛血清白蛋白的 PBS 中制備從純到 1/512 的重組參考抗 D 91/562 的加倍稀釋系列。

f) 在玻璃管中混合一體積 3% 處理過的細胞與一體積參考抗 D 和一體積 PBS。對 Anti-D 的每次稀釋重復此操作。

g) 對于六種惰性血清中的每一種（A 組 2 個，B 組 2 個，O 組 2 個），將 1 體積 3% 處理過的細胞與 1 體積惰性血清和 1 體積 PBS 混合。

h) 在 37oC 下孵育 15 分鐘。

i) 以 500rcf 離心管 15 秒。

j) 輕輕重懸細胞并評估凝集程度宏觀上。

k) 平行地，用抗 D 的滴定系列測試匯集的細胞91/562 在測試方法中使用測試酶。

l) 評分反應等級如下：- 評分觀察

C 12 細胞按鈕在一個叢中

+++ 10 個細胞按鈕脫落成幾個大塊

++ 8 細胞紐扣脫落成許多小團塊

+ 5 個細胞按鈕脫落成顆粒狀但明確的團塊

(+) 3 單元格按鈕脫落變成細小的顆粒

0  0 細胞按鈕脫落成單獨的團塊

m) 將每次滴定的反應分數相加，并將每種酶的惰性血清反應分數相加。